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抗体热稳定性测定
发布时间:2025-03-28        浏览次数:20        返回列表

    抗体热稳定性测定是确定抗体在升温过程中的稳定性,识别其热变性温度(Tm),即抗体开始失去结构稳定性的温度点,以及评估在特定温度下的长期稳定性。抗体的热稳定性直接影响其生物学活性和功能性,对于药物开发、诊断试剂和研究应用而言至关重要。


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    图1

    二、常用方法

    1.差示扫描量热法(DSC):

    • 原理:测量在加热过程中,样品与参照物之间的热流差异,以确定抗体蛋白质的热变性温度。
    • 应用:准确地评估抗体的热稳定性和变性温度,适用于抗体工程和配方开发。

    2.圆二色光谱(CD)分析:

    • 原理:利用蛋白质在特定波长下的圆偏光吸收差异,来监测蛋白质二级结构的变化。
    • 应用:评估抗体在不同温度下的结构变化,了解其稳定性特性。

    3.表面等离子共振(SPR):

    • 原理:监测抗体与特定抗原结合的亲和力变化,来评估温度对其功能性的影响。
    • 应用:分析抗体在不同温度条件下的功能稳定性。

    4.荧光光谱法:

    • 原理:通过测定蛋白质内部色氨酸和酪氨酸残基的荧光强度变化,监测蛋白质结构的变化。
    • 应用:快速评估抗体的热稳定性,适用于初步筛选和比较不同抗体或配方的稳定性。

    5.动态光散射(DLS):

    • 原理:测量抗体溶液中粒子大小分布的变化,以评估温度对其聚集状态的影响。
    • 应用:了解抗体在不同温度条件下的聚集趋势。

    实验设计考虑因素

    • 样品准备:确保抗体样品的纯度和浓度适合所选的分析方法。
    • 温度范围:选择覆盖抗体可能稳定和不稳定区域的温度范围。
    • 数据分析:利用适当的软件和统计方法,准确解读实验数据,得出有意义的结论。

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